技術(shù)人員用試管收集雞胚培養(yǎng)液，雞胚株也是毒株的一種。

　　從茂名市區(qū)經(jīng)過(guò)光華南高架橋，往南進(jìn)入茂南開(kāi)發(fā)區(qū)，再行500多米就來(lái)到茂名市疾控中心大樓。2月底，該中心所在地茂南區(qū)的英文“Guangdong-Maonan”出現(xiàn)在世界衛(wèi)生組織年度會(huì)議上，從這里分離的流感毒株將影響下一流行季全球流感疫苗的生產(chǎn)。

　　2月28日，瑞士日內(nèi)瓦，在歷經(jīng)4天對(duì)全球流感病毒流行病學(xué)、病原學(xué)及疫苗血清學(xué)分析的會(huì)議后，世界衛(wèi)生組織發(fā)布2020—2021年北半球流感疫苗推薦組份。

　　由茂名市疾控中心微檢科分離的毒株是中國(guó)內(nèi)地唯一入選的毒株，其它入選疫苗組份來(lái)自華盛頓、普吉、夏威夷等地。這一推薦建議與科學(xué)依據(jù)，將一起傳達(dá)給監(jiān)管機(jī)構(gòu)和全球疫苗生產(chǎn)商。

　　距離會(huì)場(chǎng)2萬(wàn)里之遙的茂名疾控微檢科工作人員，一如既往地忙碌：收集標(biāo)本、提取核酸、分離鑒定……每周向國(guó)家流感中心報(bào)告。

捕捉“變異的病毒”

“流感病毒尤其是甲型流感病毒變異很快。變異發(fā)生后，前一年的疫苗對(duì)于今年的病毒就不適用了?！泵屑部刂行奈z科科長(zhǎng)廖國(guó)東說(shuō)，他同時(shí)也是茂名市疾控中心流感實(shí)驗(yàn)室的負(fù)責(zé)人。他告訴記者，作為國(guó)家流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)的一個(gè)單元，茂名市疾控中心流感實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)了茂名市流感樣病例的日常監(jiān)測(cè)等工作。

根據(jù)國(guó)家流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)要求，每個(gè)地級(jí)市至少有一個(gè)哨點(diǎn)醫(yī)院，哨點(diǎn)醫(yī)院每月要采集流感樣病例標(biāo)本100份以上送至當(dāng)?shù)亓鞲斜O(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室?！拔覀兠恐苤辽僖獧z測(cè)25份標(biāo)本，從中分離的病毒株最終會(huì)被送至國(guó)家疾控中心做基因測(cè)序等后續(xù)研究?！泵部匚z科流感實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)核酸檢測(cè)的李曉君說(shuō)。

李曉君的工作，就是站在監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)的最前沿捕捉“變異的病毒”?！昂?jiǎn)單來(lái)說(shuō)，采集流感樣病例的咽拭子標(biāo)本后，在生物安全實(shí)驗(yàn)室里對(duì)標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)和病毒分離，所獲得的病毒培養(yǎng)物里面就是流感毒株。”李曉君說(shuō)，分離出病毒毒株，意味著有可能找到了生產(chǎn)疫苗的種子株。

世衛(wèi)組織每年篩選推薦疫苗株，其制備成疫苗后進(jìn)入健康人體內(nèi)，激發(fā)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出針對(duì)這類病毒的免疫力，從而達(dá)到預(yù)防新流感的效果?！安皇撬械亩局甓紩?huì)成為疫苗株，但這一切都要建立在分離毒株的基礎(chǔ)上，所以分離鑒定毒株對(duì)于預(yù)防新的流感大流行非常重要?！崩顣跃f(shuō)。

什么樣的毒株會(huì)最終成為疫苗株？廖國(guó)東介紹，首先毒株要涵蓋大部分變異特征，但在基層疾控實(shí)驗(yàn)室不具備基因測(cè)試、抗原轉(zhuǎn)變檢測(cè)的條件，因此分離毒株后上交國(guó)家疾控開(kāi)展后續(xù)檢測(cè)；其次，分離出來(lái)的毒株病毒活性好、滴度高、蛋白含量高，用其構(gòu)建的疫苗株就能符合世衛(wèi)組織的要求。

實(shí)際上，毒株從茂名分離后，到進(jìn)入世衛(wèi)組織會(huì)議討論前，經(jīng)歷了國(guó)家疾控的“關(guān)鍵一推”?！懊@株流感毒株能同時(shí)擁有優(yōu)良的細(xì)胞株和雞胚株，非常不容易?！眹?guó)家流感中心主任王大燕透露，“國(guó)家疾控拿到這株毒株后，通過(guò)基因測(cè)序，發(fā)現(xiàn)與目前流行的毒株有很大的變異。利用其構(gòu)建了疫苗重配株，與細(xì)胞株、雞胚株一起進(jìn)行系列驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)這個(gè)毒株抗原代表性好、滴度較高、蛋白含量較高。我們認(rèn)為這株值得關(guān)注，并推薦給世衛(wèi)組織?！?/p>

廖國(guó)東解釋稱，抗原代表性好則制成的疫苗對(duì)變異的病毒免疫效果佳，滴度高是指病毒量大，蛋白含量越高疫苗越經(jīng)濟(jì)，有利于疫苗的大規(guī)模生產(chǎn)。

“每年全球估計(jì)有10億例病例，其中300萬(wàn)至500萬(wàn)例為重癥病例，導(dǎo)致29萬(wàn)至65萬(wàn)例流感相關(guān)呼吸道疾病死亡。”世衛(wèi)組織發(fā)布的《2019-2030年全球流感戰(zhàn)略》提醒，流感依然是世界最大的公共衛(wèi)生挑戰(zhàn)之一?！懊磕杲臃N流感疫苗是預(yù)防流感的最有效方法?！眻?bào)告中建議。

技術(shù)人員對(duì)分離出來(lái)的流感病毒進(jìn)行鑒定和分型。

來(lái)自茂名的毒株

“‘Guangdong-Maonan’是我們實(shí)驗(yàn)室分離鑒定的毒株上傳國(guó)家流感中心系統(tǒng)后，自動(dòng)生成的地址標(biāo)識(shí)。”李曉君說(shuō)。獲世衛(wèi)組織推薦的那株茂名毒株，正是經(jīng)她手從流感標(biāo)本中提取出核酸，邁出毒株分離第一步。

“此次獲世衛(wèi)組織推薦的毒株分離自一位男性患者，2019年6月發(fā)病時(shí)采集了樣本?！泵部匚z科負(fù)責(zé)病毒分離與鑒定的陳家圖說(shuō)，“在分離毒株時(shí)，曾察覺(jué)它的滴度和效價(jià)較高，隱約感覺(jué)到它的與眾不同。”

在茂名疾控流感實(shí)驗(yàn)室，李曉君和陳家圖為一組，承擔(dān)流感病毒檢測(cè)工作。兩人分工明確，李曉君負(fù)責(zé)核酸檢測(cè)，篩選出核酸呈陽(yáng)性的標(biāo)本，再交給陳家圖作病毒分離，培養(yǎng)制成毒株。

作為哨點(diǎn)醫(yī)院，茂名市人民醫(yī)院負(fù)責(zé)采集流感患者咽拭子，放入裝有病毒保存液的存管后，低溫送至實(shí)驗(yàn)室?！皹?biāo)本要求24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)，但是越早處理質(zhì)量越高?！崩顣跃f(shuō)，“如果突發(fā)疫情，我們要馬上檢測(cè)出報(bào)告，流行病科還要等檢測(cè)結(jié)果來(lái)跟進(jìn)調(diào)查。這時(shí)也意味著大批量標(biāo)本需要檢測(cè)?！?/p>

對(duì)于每一個(gè)標(biāo)本，李曉君都要放入震蕩儀震蕩，用移液槍將其吸到試劑盒里，放入提取儀將核酸提取出來(lái)。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)，篩選出核酸呈陽(yáng)性的標(biāo)本交到陳家圖處。“完成一次核酸檢測(cè)，需要半天時(shí)間，但這只是分離毒株的前提。”李曉君說(shuō)。記錄顯示，那例特別的標(biāo)本核酸檢測(cè)結(jié)果為新甲H1N1核酸陽(yáng)性。

陳家圖需要經(jīng)常“宅”在生物安全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，專心培育細(xì)胞系和無(wú)特種病原體雞胚。他先將需分離的標(biāo)本接種到已經(jīng)培養(yǎng)好的細(xì)胞和雞胚中，分別置于二氧化碳培養(yǎng)箱和孵蛋器中培養(yǎng)，每天要觀察細(xì)胞和雞胚的生長(zhǎng)狀況，然后收集細(xì)胞培養(yǎng)液、雞胚培養(yǎng)液。

“這里面就是分離出來(lái)的病毒，最后對(duì)分離出來(lái)的病毒進(jìn)行血凝試驗(yàn)（HA）、血凝抑制試驗(yàn)（HI）等后續(xù)的鑒定和分型工作?！标惣覉D說(shuō)，整個(gè)分離過(guò)程歷時(shí)約1個(gè)月。

“分離流感病毒特別需要保證質(zhì)量，非常強(qiáng)調(diào)連續(xù)性，中間不能間斷。比如，活性細(xì)胞要定期傳代培養(yǎng)，3至4天要傳代一次，不能延遲；在接種流感病毒標(biāo)本后每天都要觀察其病變情況；培養(yǎng)物要定時(shí)收集，不然就可能作廢……”陳家圖回憶起當(dāng)初分離那株毒株時(shí)的情景，仍然記憶猶新，在做HA和HI鑒定時(shí)，就發(fā)現(xiàn)它的滴度和效價(jià)均比較高。“發(fā)現(xiàn)不同后，我們以最快速度將分離的毒株交到國(guó)家疾控?！绷螄?guó)東說(shuō)。

裝著病毒培養(yǎng)液的標(biāo)本管，里面就是毒株。

疫情下的實(shí)驗(yàn)室

成為“病毒捕捉者”的7年時(shí)間里，李曉君幾乎每天都在和流感病毒打交道，對(duì)不同的標(biāo)本重復(fù)著同樣的操作。突然站到聚光燈下，讓她直呼“太自豪了”。

據(jù)了解，茂名市疾控中心微檢科共有9名技術(shù)人員，他們的檢測(cè)工作主要分為病毒類和細(xì)菌類。新冠肺炎疫情發(fā)生后，為茂名疑似病例做病毒核酸檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)室責(zé)無(wú)旁貸。

“疫情來(lái)得那么突然，打亂了我們的常規(guī)工作。我好像多打了一份工。”陳家圖說(shuō)，原本人手緊張的實(shí)驗(yàn)室，開(kāi)足馬力投入到新冠肺炎病毒核酸檢測(cè)中去。

9人分組輪值，全員投入病毒核酸檢測(cè)，檢測(cè)標(biāo)本至今超過(guò)2000份。截至3月8日茂名確診的14個(gè)新冠病例中，包括首例在內(nèi)的8例經(jīng)過(guò)該實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確診，其余6例則在大排查期間經(jīng)第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)測(cè)出。

與平常做流感檢測(cè)只需二級(jí)防護(hù)不同，做新冠肺炎病毒核酸檢測(cè)需要穿上三級(jí)安全防護(hù)的全套裝備——密不透風(fēng)的防護(hù)服，嚴(yán)密緊實(shí)的N95口罩，護(hù)目鏡上常常汗霧迷蒙?！霸谧罹o張的時(shí)期，凌晨4點(diǎn)還在實(shí)驗(yàn)室里?！标惣覉D說(shuō)，7歲的女兒看到自己穿防護(hù)服的照片時(shí)十分驚訝，“爸爸也跟電視機(jī)里的人一樣?！?/p>

盡管這段時(shí)間重心向疫情傾斜，但每當(dāng)疫情相關(guān)檢測(cè)“松”一點(diǎn)時(shí)，大家又抓緊忙回各自的檢測(cè)工作。